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Tipo do documento: Tese
Title: Clonagem e expressão da proteína recombinante p27 (r-p27) do vírus da leucemia felina e produção de IgY aviária contra a r-p27 para utilização em imunodiagnóstico
Other Titles: Cloning and expression of p27 protein (r-p27) of Feline Leukemia Virus and avian IgY production against the r-p27 to immunodiagnostic application
Authors: Almeida, Nadia Rossi de
Orientador(a): Mazur, Carlos
Primeiro coorientador: Danelli, Maria das Graças Miranda
Primeiro membro da banca: Hagiwara, Mitika Kuribayashi
Segundo membro da banca: Reis, Jenner Karlisson Pimenta dos
Terceiro membro da banca: McIntosh, Douglas
Quarto membro da banca: Santos, Débora Regina Lopes dos
Keywords: FeLV;imunodiagnóstico;IgY;immunodiagnosis
Área(s) do CNPq: Medicina Veterinária
Idioma: por
Issue Date: 20-Feb-2013
Publisher: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
Sigla da instituição: UFRRJ
Departamento: Instituto de Veterinária
Programa: Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias
Citation: ALMEIDA, Nadia Rossi de. Clonagem e expressão da proteína recombinante p27 (r-p27) do vírus da leucemia felina e produção de IgY aviária contra a r-p27 para utilização em imunodiagnóstico. 2013. 87 f. Tese (Doutorado em Ciências Veterinárias). Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, 2013
Abstract: O Vírus da Leucemia Felina (FeLV) é um membro da família Retroviridae, gênero Gammaretrovirus, que representa uma importante causa de morbidade e mortalidade entre os gatos domésticos. No Brasil, o acesso ao diagnóstico da Leucemia Viral Felina ainda é restrito devido ao alto custo do teste comercial disponível, que detecta o antígeno viral p27. Para utilização em imunodiagnóstico, a IgY aviária apresenta uma série de vantagens sobre os anticorpos IgG de mamíferos, como o baixo custo da técnica e manutenção dos animais, alto rendimento dos anticorpos purificados e caráter bioético. O objetivo do presente estudo foi o desenvolvimento de uma proteína de nucleocapsídeo viral p27 recombinante, a r-p27, para elicitar anticorpos aviários, visando contribuir com o imunodiagnóstico das infecções pelo FeLV no país. Esta tecnologia poderá possibilitar o acesso ao diagnóstico e a melhor compreensão dos estudos de prevalência da infecção. Para tanto, a região codificante da p27 nativa do FeLV foi amplificada, clonada e expressa em Escherichia coli, e sua reatividade contra os anticorpos para p27 nativa foi verificada com o kit comercial de imunocromatografia. A r-p27 foi inoculada em coelhos e galinhas, para produção de IgG e IgY específicas, respectivamente. Estes anticorpos foram avaliados pela técnica de imunofluorescência indireta (IFI) contra a p27 nativa, em esfregaços de sangue de animais positivos e negativos para o FeLV. Ambos os tipos de imunoglobulinas apresentaram reatividade para a p27 recombinante e nativa do FeLV. A produção de IgY para a r-p27 representou um método de alto rendimento e baixo custo, promissor para o desenvolvimento de imunodiagnóstico da Leucemia Viral Felina
Abstract: Feline Leukemia Virus (FeLV) is a gammaretrovirus, which represents an important cause of morbidity and mortality among domestic cats. In Brazil, the access to feline leukemia diagnosis is still limited due to the high cost of available commercial test to detect the viral antigen p27. The production of avian IgY instead of mammal IgG has several advantages, like lower costs of the technique, easier animal maintenance, high yields of purified antibodies and better acceptance due to bioethical characteristics. The aim of this study was the development of a recombinant viral p27 protein, the r-p27, to elicit avian antibodies, aiming to enable immunodiagnosis of FeLV infections. This technology can provide access to diagnosis and better understanding of prevalence studies. For this purpose, the coding region of the FeLV p27 protein was cloned and expressed in Escherichia coli and the reactivity against anti-p27 antibody was proven before commercial immunochromatography kit. To obtain IgG and IgY anti-p27, r-p27 was inoculated into rabbits and chickens, respectively, and the antibodies produced were tested by indirect immunofluorescence (IFA). Both immunoglobulins showed reactivity against recombinant and native p27. The production of IgY against r-p27 represents a method of high yields of purified antibodies and low cost, promising for the development of immunodiagnosis
URI: https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9574
Appears in Collections:Doutorado em Ciências Veterinárias

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