Estudo preliminar da secreção cutânea em Aparasphenodon (Lophiohylinae, Anura): composição bioquímica e potencial tóxico

Abstract

O presente estudo buscou determinar a composição química das secreções brutas expelidas por duas espécies de Aparasphenodon, a partir do isolamento, purificação e identificação estrutural destes compostos. Para tal, indivíduos de A.brunoi (n=5) e A.arapapa (n=3) foram coletados na Ilha da Marambaia, Mangaratiba (RJ) e no município de Ilhéus (BA), respectivamente. As secreções foram obtidas por estímulo elétrico suave e mostraram-se translucidas e pouco viscosas, com rendimento aproximado de 4 mg de amostra/indivíduo. Para cada espécie, foi realizada cromatografia em camada delgada; o reagente revelador ninidrina indicou presença de grupos amínicos após aparecimento da cor violeta. As amostras foram então submetidas à cromatografia liquida de alta eficiência analítica, sendo detectados dois picos majoritários com mesmo tempo de retenção (0,88 e 1,44 min) em ambas as análises, indicando assim a presença de compostos semelhantes nas duas espécies. Da mesma forma, a purificação das amostras realizada por cromatografia liquida de alta eficiência semi-preparativa apresentou o mesmo número de frações para ambas as espécies. A determinação estrutural foi determinada por LC-MS/MS apenas para A. brunoi e revelou alta incidência de colágeno e outras proteínas não caracterizadas. Os ensaios biológicos foram realizados nas concentrações de 1 µg.mL-1 e 10 µg.mL-1 para ambas as espécies. O ensaio de viabilidade celular não apresentou redução da sobrevivência das leveduras, assim como a dosagem de peroxidação lipídica não mostrou reação com malonaldeído, em todos os casos testados. Por outro lado, o ensaio de dano mitocondrial revelou toxicidade na concentração de 10 µg.mL-1, reduzindo de forma discreta a viabilidade celular, em ambas as amostras. Concluímos então que as duas espécies possuem proteínas como seu principal componente e, a nível celular, não são nocivas em 1 µg.mL-1, mas podem promover danos quando em 10 µg.mL-1. Além disso, como os perfis revelados para ambos os extratos, tanto nos ensaios químicos como nos biológicos, foram muito próximos, a existência de um padrão na composição química das secreções cutâneas em anfíbios de um mesmo gênero pode ser reforçada, ainda que as espécies se encontrem em condições ambientais distintas.