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Tipo do documento: Dissertação
Title: Caracterização da resistência antimicrobiana e estudo fenogenotípico da produção de betalactamases em enterobactérias associadas à etiologia da mastite bovina
Other Titles: Antimicrobial resistance characterization and pheno-genotypic study of betalactamase production in enterobacteria associated with bovine mastitis
Authors: Santiago, Gabrielli Stefaninni
Orientador(a): Coelho, Shana de Mattos de Oliveira
Primeiro coorientador: Souza, Miliane Moreira Soares de
Primeiro membro da banca: Costa, Renata Garcia
Segundo membro da banca: Pereira, Ingrid Annes
Keywords: Mastite bovina;Beta lactamases;Enterobactérias;Bovine Mastitis;Beta lactamases;Enterobacteria
Área(s) do CNPq: Medicina Veterinária
Idioma: por
Issue Date: 16-Sep-2013
Publisher: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
Sigla da instituição: UFRRJ
Departamento: Instituto de Veterinária
Programa: Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias
Citation: SANTIAGO, Gabrielli Stefaninni. Caracterização da resistência antimicrobiana e estudo fenogenotípico da produção de betalactamases em enterobactérias associadas à etiologia da mastite bovina. 2013. 67 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Veterinárias) - Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, 2013.
Abstract: A utilização de antimicrobianos na profilaxia das infecções intramamárias e na eliminação de prováveis fontes de infecção nas fazendas leiteiras constituem importantes medidas de controle da mastite bovina. No entanto, o uso inadequado de antimicrobianos pode gerar o aparecimento de cepas resistentes. As enterobactérias estão entre os principais agentes etiológicos da mastite bovina ambiental e são frequentemente resistentes aos antimicrobianos, em especial aos β-lactâmicos devido à produção de betalactamases. Algumas enterobactérias produzem betalactamases de amplo espetro (ESBL) como AmpC, TEM, SHV, CTX-M e carbapenemase que podem ser classificadas em diversos grupos dependendo da estrutura molecular e substrato de atuação. Além disso, podem desenvolver resistência a outros antimicrobianos que são frequentemente utilizados no tratamento de infecções causadas por enterobactérias. O presente estudo avaliou o perfil fenogenotípico de resistência aos β-lactâmicos, com ênfase na detecção de betalactamases, e outras classes de antimicrobianos em 42 isolados provenientes de 381 amostras de leite obtidas de 9 fazendas situadas na mesorregião do Rio de Janeiro-RJ de modo a contribuir com dados que ajudem no subsídio para a implementação de medidas de controle dessa enfermidade. As fazendas A e D apresentaram condições higiênico-sanitárias precárias, muita contaminação fecal e as maiores taxas de prevalência de enterobactérias no leite mastítico. Os isolados suspeitos de produzirem AmpC foram submetidos ao teste de disco aproximação que também foi realizado, em adição ao Etest, para os suspeitos de produzirem ESBL (2be). O Teste de Extrato Tridimensional (TET) foi realizado para todos estes suspeitos. A produção de carbapenemase foi avaliada por meio do Teste de Hodge Modificado e todos os isolados foram submetidos à técnica de PCR para busca dos genes aacC2, qnr, blaTEM, blaSHV,blaCTX-M e blaampC. As enterobactérias predominantes nas amostras de leite foram o Proteus mirabilis (45%) e Escherichia coli (40%). O maior percentual de resistência foi à ciprofloxacina e os genes de resistência aos aminogliosídeos (aacC2) e a quinolonas (qnr) foram detectados em 25% e 66,7% de isolados resistentes a estes antimicrobianos, respectivamente. Foi constatada uma elevada variabilidade no perfil fenotípico e a multirresistência foi detectada em 97,6% dos isolados avaliados. Todos os isolados produziram betalactamases, o grupo 1 foi predominante e 30% das betalactamases deste grupo foram classificadas como sendo do tipo induzível. Nenhum isolado apresentou o perfil fenotípico para ESBL (2be) nem carbapenemase. O TET confirmou a negatividade da produção de ESBL (2be) porém revelou ser pouco sensível na detecção de AmpC. Os genes blaTEM, blaSHV,blaampC e blaCTX-M foram detectados em 61,9%, 42,8%, 23,8%, 9,5% dos isolados, respectivamente. A espécie P. mirabilis blaTEM + pertencente ao grupo 1e e a espécie E. coli negativa para todos os genes pertencente ao grupo 2a foram prevalentes. Um total 66% dos isolados classificados como grupo 2 apresentou os genes blaTEM e blaSHV e 15% pertencentes ao grupo 1 apresentaram o gene blaampC. A variabilidade fenogenotípica detectada indica a presença mecanismos múltiplos de resistência antimicrobiana, o que é preocupante tendo em vista a disseminação da resistência bacteriana determinando um impacto clínico e epidemiológico para a medicina veterinária e humana.
Abstract: The use of antibiotic in the prophylaxis of intramammary infections and in the elimination of its possible sources in dairy farms is an important control measure. However, the inappropriate use of antibiotics can result in the appearance of resistant strains. Enterobacteriaceae are the main etiological agents of environment bovine mastitis and are often resistant to antimicrobials, especially to beta-lactam antibiotics due to the production of beta-lactamases. Some Enterobacteriaceae can produce broad-spectrum beta-lactamases such as AmpC, TEM, SHV, CTX-M and carbapenemase and can be classified into several groups according the molecular structure and substrate activity. Furthermore, these bacteria may develop resistance to other antimicrobial agents which are used in the treatment of infections caused by enteric bacteria. The present study evaluated the profile fenogenotipic resistance to β-lactams, with emphasis on the detection of beta-lactamases, and other classes of antimicrobials in 42 isolates from 381 milk samples obtained from nine farms located in the middle region of the Rio de Janeiro-RJ so to contribute data to help in the grant for the implementation of measures to control this disease. Farms A and D had poor sanitary conditions, much fecal contamination and the highest rates of prevalence of Enterobacteriaceae in mastitic milk. The AmpC production was confirmed by disk approach that also was performed in addition to Etest for suspected ESBL (2be) producing. The Three-Dimensional Extract Test was conducted for all these suspects. The carbapenemase production was performed using the Modified Hodge Test and all isolates were subjected to PCR searching aacC2, qnr, blaTEM, blaSHV, blaCTX-M and blaampC. The enterobacteria prevalent in milk samples were Proteus mirabilis and Escherichia coli. The higher percentage of the resistance was to ciproflaxin and aacC2 and qnr were detected in 25% and 66.7% of isolates resistant to these antibiotics, respectively. We observed a high variability in phenotypic profile and multidrug resistance was detected in 97.6% of isolates. The group 1 was predominant and 30% of betalactamases of this group were classified as inducible type. No isolate showed phenotypic profile for ESBL (2be) or carbapenemase. The TET confirmed the negativity of ESBL (2be) production but proved to be less sensitive in the detection of AmpC. The blaTEM, blaSHV, blaCTX-M and blaampC genes were detected in 61.9%, 42.8%, 23.8%, 9.5% of isolates, respectively. Any isolate showed all bla genes simultaneously. The P. mirabilis blaTEM + belonging to a group 1e and E. coli negative for all genes belonging to a group 2a are prevalent. A total 66% of the isolates classified as group 2 presented blaTEM and blaSHV genes and 15% belonging to the group 1 showed blaampC gene. The pheno-genotypic variability detected indicates multiple mechanisms of antimicrobial resistance which is worrying due of the resistance bacterial spread determining a clinical and epidemiological impact for veterinary and human medicine.
URI: https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/11967
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